Extracellular vesicles in infectious diseases caused by protozoan parasites in buffaloes

Extracellular vesicles (EVs) are small membrane-bound vesicles of growing interest in vetetinary parasitology. The aim of the present report was to provide the first isolation, quantification and protein characterization of EVs from buffalo (Bubalus bubalis) sera infected with Theileria spp. Methods: Infected animals were identified through optical microscopy and PCR. EVs were isolated from buffalo sera by size-exclusion chromatography and characterized using western blotting analysis, nanoparticle tracking analysis and transmission electron microscopy. Subsequently, the proteins from isolated vesicles were characterized by mass spectrometry. Results: EVs from buffalo sera have shown sizes in the 124-140 nm range and 306 proteins were characterized. The protein-protein interaction analysis has evidenced biological processes and molecular function associated with signal transduction, binding, regulation of metabolic processes, transport, catalytic activity and response to acute stress. Five proteins have been shown to be differentially expressed between the control group and that infected with Theileria spp., all acting in the oxidative stress pathway. Conclusions: EVs from buffaloes infected with Theileria spp. were successfully isolated and characterized. This is an advance in the knowledge of host-parasite relationship that contributes to the understanding of host immune response and theileriosis evasion mechanisms. These findings may pave the way for searching new EVs candidate-markers for a better production of safe biological products derived from buffaloes.(AU)

Enterotoxin-encoding genes in Staphylococcus aureus from buffalo milk / Genes codificadores de enterotoxinas em Staphylococcus aureus no leite de búfalas

This paper investigated the occurrence of Staphylococcus aureus and the detection of enterotoxin-encoding genes of these strains in milk collected from 30 Murrah buffaloes used to produce dairy products in Brazil. A total of 68 strains of Staphylococcus aureus were found as identified by conventional laboratory tests, and thus screened for sea, seb, sec, sed, see, seg, seh and sei enterotoxin-encoding genes by polymerase chain reaction (PCR). Twelve strains containing enterotoxin-amplified genes were found, with higher expression for the sei and seh genes. These results can be attributed to animal health and inadequate cleaning of the equipment, indicating the need for better quality control in animal production and health lines. The results of this study with the presence of pathogens and their enterotoxigenic potential indicate a source of food poisoning, as well as being a pioneering study in the detection of new enterotoxins for buffalo milk.(AU)

Este estudo investigou a ocorrência de isolados de Staphylococcus aureus e a detecção de genes que codificam a enterotoxigenicidade dessas cepas em leite de búfala utilizado na produção de laticínios no Brasil. As amostras foram coletados em 30 búfalos da raça Murrah, identificado por testes laboratoriais convencionais, foram identificados um total de 68 cepas de S. aureus e rastreados para os genes que codificam a enterotoxina sea, seb, sec, sed, see, seg, seh and sei por reação em cadeia da polimerase (PCR). Doze cepas contendo genes da enterotoxina foram amplificadas, com maior expressão para os genes sei e seh. Esses resultados podem ser atribuídos à saúde animal e à higiene inadequada do equipamento, indicando a necessidade de melhor controle de qualidade nas linhas de produção e saúde animal. Os resultados desta pesquisa, com a presença de patógenos e seu potencial enterotoxigênico, indicam uma fonte de intoxicação alimentar, além de ser uma pesquisa pioneira na detecção de novas enterotoxinas para o leite de búfala.(AU)

Occurrence of serological reactions for serogroup Sejroe (CTG and Prajtino) in female buffalo in the state of Pernambuco, Brazil

ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the occurrence of anti-Leptospira spp. antibodies in female buffalo in the state of Pernambuco. A total of 123 female buffalo blood samples were collected from five properties distributed in the state of Pernambuco. The microscopic agglutination test was used to study anti-Leptospira spp. antibodies. The occurrence of anti-Leptospira spp. antibodies was 28.5% (35/123; CI 20.7-37.3%) and on different properties, the occurrence ranged from 28.6% to 80.0%, with 100% of the properties showing animals with positive results. The serovars of the serogroup Sejroe with a higher incidence were Hardjoprajtino (CTG strain, 49.1%) and Hardjo (Prajtino genotype, 43.2%), followed by serogroup Grippotyphosa with the Grippotyphosa serovar (3.9%), serogroup Pomona with the Pomona serovar (1.9%), and the Icterohaemorrhagiae serovar Copenhageni (1.9%). This was the first record of the occurrence of anti-Lepstospira spp. antibodies in female buffalo in the state of Pernambuco. Control measures are necessary to prevent health and economic losses, given that the agent involved affects animal reproduction, triggering drops in conception rates or even clinical cases of abortion.

Ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil / Infection occurrence of Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the state of Pernambuco, Brazil

Objetivou-se com estudo determinar a ocorrência da infecção por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus em búfalos no estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletadas 133 amostras biológicas (muco cervicovaginal e raspado prepucial) de animais, procedentes de oito propriedades, de diferentes regiões do estado. O material biológico coletado foi transferido para solução salina tamponada (PBS) e, posteriormente, inoculado em meios de transporte específicos, Lander para diagnóstico de C. fetus subsp. venerealis e Diamond para T. foetus. Para o diagnóstico das infecções por Campylobacter fetus subsp. venerealis e Tritrichomonas foetus, as amostras foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) e cultivadas em meio ágar Columbia acrescido de antibiótico e Diamond, respectivamente. Para pesquisa de C. fetus subsp. venerealis, observou-se uma ocorrência de 1,8% (2/113) de animais positivos no exame microbiológico com confirmação pela PCR. Em relação à procedência, observou-se que 100% das amostras positivas pertenciam a dois machos do mesmo rebanho. Nenhum animal foi positivo na pesquisa de T. foetus. Este é o primeiro registro da infecção por C. fetus subsp. venerealis em búfalos no Brasil. Apesar da baixa ocorrência, recomenda-se adoção de medidas de controle, com o intuito de se evitar a disseminação do agente para outros rebanhos.(AU)

The objective this study was to determine the occurrence of infection with Campylobacter fetus subsp. venerealis and Tritrichomonas foetus in buffaloes in the State of Pernambuco, Brazil. Biological samples were collected (cervico vaginal mucus and shaved prepucial) of 113 animals, coming from 8 properties in different regions of the state. The biological material collected was transferred into phosphate buffered saline (PBS) and inoculated in the specific transport, Lander for diagnosis of C. fetus subsp. venerealis and Diamond for T. fetus subsequently. For the diagnosis of infection by Campylobacter fetus subsp. venrealis and Tritrichomonas foetus the samples were submitted to Polymerase Chain Reaction (PCR) grown in Columbia agar plus antibiotics and Diamond, respectively. There was an occurrence of 1.8% (2/113) of positive animals in the microbiological examination with confirmation by PCR, for C. fetus subsp. venerealis. We observed that 100% of positive samples were from two (2) males from the same herd. No animals were positive for T. foetus. This is the first report of infection with C. fetus subsp. venerealis in buffaloes in Brazil. Despite rare occurrence, control measures are recommended in order to prevent the spread of the agent to other herds.(AU)

Prevalence and identification of Salmonella spp. in water buffaloes from São Paulo State, Brazil / Prevalência e identificação de Salmonella spp. em búfalos do Estado de São Paulo, Brasil

O objetivo do estudo foi investigar a prevalência de Salmonella spp. em amostras de fezes de búfalos do estado de São Paulo, Brasil, e identificar os sorotipos isolados. Foram examinadas 116 amostras de suabes retais de búfalos das raças Jafarabadi e Murrah, coletadas em triplicata, em seis propriedades rurais localizadas nas regiões Central, Centro-Oeste e Nordeste do estado de São Paulo, Brasil. Para avaliar a presença de Salmonella spp., foram utilizados três diferentes caldos de enriquecimento (caldo selenito cistina, caldo tetrationado Muller-Kauffmann e caldo Rappaport-Vassiliadis) e dois diferentes meios de cultura (ágar verde brilhante modificado e ágar XLT4). Das 116 amostras de suabes retais examinadas, oito amostras (6,90%; 8/116) foram positivas para Salmonella spp., incluindo quatro sorotipos: S. Panama (50%; 4/8), S. Agona (25%; 2/8) , S. Newport (12,5%; 1/8) e S. Saintpaul (12,5%; 1/8), todos isolados de búfalos sem sinais clínicos de salmonelose, indicando a importância dos animais assintomáticos como fonte de infecção para outros animais e seres humanos. Das seis propriedades rurais avaliadas, apenas em duas fazendas (33,3%; 2/6) não foi detectada Salmonella spp. O uso de mais de um caldo de enriquecimento seletivo e de mais de um meio de cultura é indicado para o isolamento de Salmonella.(AU)

Characterization of Staphylococcus spp. strains in milk from buffaloes with mastitis in Brazil: the need to identify to species level to avoid misidentification / Caracterização de cepas de Staphylococcus spp. isoladas de leite de búfalas com mastites em Brasil: a necessidade de se identificar até nível de espécie para evitar erros de identificação

Mastitis is an inflammation of the mammary gland that affects dairy cattle worldwide causing economic losses. Coagulase-negative staphylococci (CNS) are the predominant cause of this type of infection. We have recently showed that coagulase-positive staphylococci could be misidentified. So, the aim of this study was to characterize the Staphylococcus spp. strains initially classified as coagulase-negative Staphylococci, isolated from buffalo with subclinical mastitis. Milk of buffaloes with mastitis in herds was collected and 9 strains were identified as CNS by phenotypic tests. Molecular methodologies latter identified the strains as coagulase-negative Staphylococcus chromogenes (5), coagulase-positive Staphylococcus hyicus (2) and coagulase-positive Staphylococcus aureus (2). Our results strongly support the need to identify the isolates to a species level in order to avoid misidentification and to be aware of the classification using the coagulase test alone.(AU)

A mastite é uma inflamação da glândula mamária que afeta o gado leiteiro em todo o mundo, causando perdas econômicas. Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) são a causa predominante desse tipo de infecção. Mostrou-se recentemente que Staphylococcus coagulase-positiva podem ser identificados erroneamente. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar cepas de Staphylococcus spp. inicialmente classificados como Staphylococcus coagulase-negativa, isolados de búfalas com mastite subclínica. O leite de búfalas com mastite foi coletado, e nove cepas foram identificadas como SCN por testes fenotípicos. Metodologias moleculares identificaram as cepas como Staphylococcus chromogenes coagulase-negativa (5) Staphylococcus hyicus coagulase-positiva (2) e Staphylococcus aureus coagulase-positiva (2). Os resultados reforçam a necessidade de identificar as cepas em termos de espécie, a fim de se evitarem erros de identificação e estar atento à classificação utilizando o teste de coagulase sozinho.(AU)

Species identification and antimicrobial susceptibility profile of bacteria causing subclinical mastitis in buffalo / Identificação de espécies e perfil de susceptibilidade antimicrobiano de bactérias causadoras de mastite subclínica em búfalos

Microorganisms causing subclinical mastitis in water buffalo were isolated from 20 buffalo milk samples at four dairy farms located in central region of São Paulo State, Brazil, through testing of somatic cell count (SCC), standard plate count (SPC), biochemical, PCR assays and antimicrobial profile. The SCC showed average of 721,000 cells/mL in the milk, indicating the presence of subclinical mastitis. The overall average for SPC was 1.8 x 104 CFU/mL. The microorganism most frequently isolation according to biochemical tests were: Staphylococcus epidermidis (17%), Staphylococcus aureus (15%), Bacillus spp. (14%), Acinetobacter spp. (12.5%); with intermediate frequency: Pseudomonas aeruginosa (9.5%); Shigella flexneri (7.0%), Streptococcus spp. (5.5%), Corynebacterium spp. (5.0%), Escherichia coli (4.5%), Serratia marcescens (4.0%), Stenotrophomonas maltophilia (4.0%), and low incidence: Klebsiella rhinoscleromatis (0.5%), Klebsiella ozaenae (0.5%), Tatumella ptyseos (0.5%), Enterobacter cloacae (0.5%). The molecular analysis indicated that samples positive by culture method of the genera Staphylococcus, Streptococcus and E. coli were positive by PCR. Para S. aureus and S. epidermidis the highest percentages of observed sensitivity were gentamicin (100%) and vancomycin (100%); for the genus Streptococcus to gentamicin and oxacillin and E. coli to Ampicilin. These findings may help in the control and treatment of subclinical mastitis in buffaloes and contribute to improving the efficiency and quality of the milk produced.(AU)

Microrganismos causadores de mastites subclínicas em búfalas foram isolados desde 20 amostras de leite de búfalos de quatro granjas leiteiras localizadas na região central do Estado de São Paulo, Brasil, através dos testes contagem de células somáticas (CCS), contagem padrão em placas (CPP), provas bioquímicas, reações de PCR e perfil antimicrobiano. A CCS apresentou uma mediana de 721.000 cel/mL no leite, indicando presença de mastite subclínica. A média geral de CPP foi de 1,8x104 UFC/mL. Os microrganismos com maior frequência de isolamento segundo os testes bioquímicos foram: Staphylococcus epidermidis (17%), Staphylococcus aureus (15%), Bacillus spp. (14%), Acinetobacter spp. (12,5%); frequência intermediaria: Pseudomonas aeruginosa (9,5%); Shigella flexneri (7,0%), Streptococcus spp. (5,5%), Corynebacterium spp. (5,0%), Escherichia coli (4,5%), Serratia marcescens (4,0%), Stenotrophomonas maltophilia (4,0%), e baixa incidência: Klebsiella rhinoscleromatis (0,5%), Klebsiella ozaenae (0,5%), Tatumella ptyseos (0,5%), Enterobacter cloacae (0,5%). A análise molecular indicou que as amostras positivas pelo método de cultura dos gêneros Staphylococcus, Streptococcus e Escherichia coli foram positivas por PCR. Para S. aureus e S. epidermidis os maiores percentuais de sensibilidade observados foram gentamicina (100%) e vancomicina (100%); para o gênero Streptococcus à gentamicina e oxacilina e para E. coli à ampicilina. Este resultados podem ajudar no controle e tratamento da mastite subclínica em búfalos e contribuir para melhorar a eficiência e qualidade do leite produzido.(AU)

Mastites em ruminantes no Brasil / Mastitis in ruminants in Brazil

A mastite é uma doença complexa e considerada uma das principais causas de perdas à indústria leiteira mundial. Objetivou-se com esta revisão compilar informações dos últimos dez anos sobre a mastite em ruminantes no Brasil. A prevalência da mastite subclínica chega a 48,64% na espécie bovina, 30,7% na espécie caprina, 31,45% na espécie ovina e 42,2% na espécie bubalina, destacando-se a etiologia por Staphylococcus spp. Os fatores de risco associados à ocorrência de mastite estão relacionados a problemas no saneamento ambiental e ao manejo dos animais. As bactérias isoladas do leite mastítico apresentam maior percentual de resistência a penicilina, ampicilina, amoxicilina e neomicina e a utilização de técnicas moleculares no diagnóstico dos agentes causadores de mastites no país, ainda é escassa o que dificulta a obtenção de um diagnóstico mais rápido, sensível e específico.(AU)

Mastitis is a complex disease and is considered one of the main causes of losses to the global dairy industry. The objective of this review was to compile information for the last ten years of mastitis in ruminants in Brazil. The prevalence of subclinical mastitis was 48.64% in cattle, 30.7% in goats, 31.45% in sheep and 42.2% in the buffalo species, with especial participation of Staphylococcus spp. in the etiology. Risk factors associated with the occurrence of mastitis were related to problems in environmental sanitation and handling of animals. The largest percentage of resistance of microorganisms to antimicrobials was for penicillin, ampicillin, amoxicillin and neomycin. The use of molecular tools for diagnosis of mastitis-causing agents in the country is still scarce, making it difficult to obtain a faster, sensitive and specific diagnosis.(AU)

Detecção de Brucella abortus em linfonodos de búfalas (Bubalus bubalis) em diferentes fases da gestação / Detection of Brucella abortus in lymph nodes of buffalo cows (Bubalus bubalis) at different stages of pregnancy

O objetivo do presente trabalho foi verificar a presença do DNA de Brucella abortus e caracterizar as lesões causadas por esse agente em linfonodos de búfalas. Foram utilizadas 19 búfalas em diversos estágios de gestação, sorologicamente positivas para brucelose, submetidas ao abate sanitário, das quais se coletou fragmentos de diversos linfonodos. A idade fetal foi determinada através de exames ultrassonográficos associados à mensuração dos fetos durante a necropsia. Amostras foram coletadas e submetidas à qPCR e histopatologia. A detecção de DNA de B. abortus nos linfonodos das búfalas avaliadas foi verificada a partir do quarto mês de gestação em sete búfalas e em uma búfala pós-parição. Os achados histológicos foram linfadenite aguda a crônica. A presença de DNA de B. abortus foi detectada em todos os grupos de linfonodos avaliados, sendo que os linfonodos mais acometidos foram os mamários...

The objective of this study was to detect Brucella abortus in lymph nodes of buffaloes as well as to describe the lesions caused. Nineteen buffalo cows in various stages of pregnancy, serologically positive for brucellosis and subjected to culling were used. Fetal age was determined by ultrasound examination and the size of fetuses was measured at necropsy. Fragments of lymph nodes were collected for histopathology and qPCR. The detection of B. abortus DNA in the lymph nodes was checked from the fourth month of pregnancy in seven buffaloes and in a post-calving buffalo. Acute to chronic lymphadenitis was histologically diagnosed. B. abortus DNA was detected in all evaluated groups of lymph nodes; the mammary lymph nodes were the most affected...

Detecção sorológica e molecular de Anaplasma marginale em búfalos na Ilha de Marajó, Pará / Serological and molecular detection of Anaplasma marginale in water buffaloes on Marajó Island, State of Pará, Brazil

O objetivo do estudo foi testar a prevalência sorológica e molecular de Anaplasma marginale em búfalos do municipio de Soure, Ilha de Marajó, estado do Pará, Brasil. Para a pesquisa sorologica foram selecionados randomicamente 800 animais e para a pesquisa molecular 50 destes animais foram aleatoriamente escolhidos. Para quantificar a prevalência sorológica utilizou-se o ensaio de imunoadsorção enzimático indireto (iELISA) com antígeno total contendo proteínas de superfície externa e para quantificar a prevalência molecular utilizou-se a reação em cadeia da polimerase (PCR), envolvendo a amplificação de fragmento gênico da proteína de superfície maior 5 (MSP5). A prevalência de animais positivos no ELISA para A. marginale foi de 25% (200/800). Na PCR foi detectada a presença de A. marginale em 2% (1/50) dos animais. Embora apenas um animal tenha sido positivo na PCR, observou-se que o mesmo foi negativo no ELISA. A presença do agente, mesmo em baixa prevalência, mostra que os bubalinos podem funcionar como um importante reservatório desse patógeno para os rebanhos bovinos da região norte do Brasil.

The aim of the study was to test the molecular and serological prevalence of Anaplasma marginale in water buffaloes of the Marajó Island, State of Pará, Brazil. For serologic research were randomly selected 800 buffaloes and for molecular research 50 of these animals were randomly chosen. To quantify the serological prevalence we used the indirect enzyme linked immunosorbent assay (iELISA) with total antigen containing proteins outer surface. To quantify the prevalence molecular was used the polymerase chain reaction (PCR) involving gene amplification fragment larger surface protein 5 (MSP5). The prevalence of positive animals in iELISA was 25% (200/800). In the PCR we detected the presence of A. marginale in 2% (1/50) of animals. Although only one animal was positive in PCR, we found that it was negative in ELISA. The presence of the agent, even in low prevalence, shows that buffaloes can act as an important reservoir for transmission of the pathogen to cattle in northern Brazil.

Ocorrência de paratuberculose em búfalos (Bubalus bubalis) em Pernambuco / Occurrence of paratuberculosis in buffaloes (Bubalus bubalis) in Pernambuco

A paratuberculose (doença de Johne) é uma das doenças de maior importância econômica para ruminantes em vários países e pode representar uma ameaça ao desenvolvimento da pecuária brasileira. É uma doença infecto-contagiosa que provoca enterocolite granulomatosa crônica, incurável e de difícil controle, cujo agente é o Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Descreve-se a ocorrência de paratuberculose em um rebanho de búfalos no Estado de Pernambuco, Brasil. Não foi encontrado registro, na literatura, da ocorrência de paratuberculose em búfalos no país. De 100 búfalos, cinco mostravam sinais clínicos característicos da doença. À necropsia de dois animais as lesões estavam restritas ao intestino delgado com evidente espessamento da mucosa, aumento de linfonodos mesentéricos e vasos linfáticos proeminentes e dilatados. À microscopia, observaram-se na mucosa do intestino, infiltrado inflamatório granulomatoso com numerosos macrófagos epitelióides e células gigantes de Langhans, além de bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR) visualizados através da coloração de Ziehl-Neelsen (ZN). Nos linfonodos mesentéricos, havia espessamento da cápsula e marcada inflamação granulomatosa. O exame direto pela técnica de ZN para pesquisa do bacilo em esfregaços de fezes, raspado de mucosa intestinal e imprint de linfonodos mesentéricos resultou positivo. A PCR IS900 específico de linfonodo mesentérico e mucosa intestinal revelou amplificação de um fragmento de aproximadamente 110pb, confirmada pela comparação com outras sequências de M. avium subsp. paratuberculosis disponíveis no GenBank.

Paratuberculosis (PTB) is a disease of great economical importance for ruminant in several countries and represents a threat to the development of Brazilian livestock. The contagious disease caused by chronic PTB leads to incurable granulomatous enterocolitis of difficult control. PTB is caused by the Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). No record on the occurrence of paratuberculosis in buffaloes in Brazil could be found. Five of 100 buffaloes in a herd in Pernambuco-Brazil showed clinical signs characteristic of PTB. At necropsy, of two animals the lesions were restricted to the small intestine with thickening and corrugation of the mucosa, increase of mesenteric lymph nodes and prominent lymph vessels. Histopathology revealed granulomatous inflammation infiltrated with numerous epithelioid macrophages, Langhans type giant cells, and clusters of Ziehl-Neelsen (ZN) positive organisms within the intestinal mucosa. In the mesenteric lymph nodes there was thickening of the capsule and marked granulomatous inflammation. Smears of feces and scrapping smears were prepared from intestinal mucosa and cut surface of mesenteric lymph nodes and, stained by the Ziehl-Neelsen method for research of acid fast bacilli, with positive results. Lymph nodes and intestinal mucosa revealed at IS900 specific polymerase chain reaction amplification of a fragment of about 110pb, confirmed by the comparison with other sequences of M. avium subsp. paratuberculosis available in GenBank.

Diagnosis of brucellosis in low titred buffaloes

A total of 452 serum samples collected from non-vaccinated buffaloes were subjected to serological tests by using Rose Bengal Plate Agglutination Test [RBPT], Slow Tube Agglutination Test [SAT] and indirect ELISA [iELISA] detected 12.83%, 11.28% and 19.25% positive samples for brucellosis respectively. The relative sensitivity of RBPT and SAT was found 62.07% and 55.17%, respectively, considering iELISA as a gold standard test while the specificity was found 98.90% in RBPT and 99.18% in SAT; the overall agreement of RBPT and SAT with iELISA was 91.81% and 90.71%, respectively. Twenty one isolates out of 61 B.melitensis biovar 3 were isolated from buffaloes serologically positive to iELISA but negative to SAT of low titre ranged from 1:10 to 1:40. Therefore, iELISA was found to be a better serological test as compared with RBPT and SAT and it could be advocated for screening of brucellosis among buffaloes as will as the suspicious and /or the latent infectious cases

Resposta imune-humoral de búfalos (Bubalus bubalis) contra Anaplasma marginale (Theiler, 1910) / Immune-humoral response of water buffalo (Bubalus bubalis) against Anaplasma marginale (Theiler, 1910)

O objetivo do presente estudo foi analisar a resposta imune humoral anti-Anaplasma marginale em búfalos (Bubalus bubalis) naturalmente infectados. Amostras de soro e de colostro/leite coletadas de búfalas adultas por um período de 335 dias após o parto e de soros dos seus bezerros do nascimento até 365 dias de vida, foram usadas para a realização do método ELISA indireto. Os dados foram analisados como a média de um grupo de animais, em diferentes faixas etárias, durantes os anos de 1999/2000 e individualmente (duas búfalas e dois bezerros), no ano de 2005. Os soros dos animais analisados em grupos apresentaram títulos de anticorpos abaixo do ponto de corte (D.O. = 0,265 e NE > 3) durante os primeiros 90 e 105 dias, para as búfalas e para os seus bezerros, respectivamente, mas em seguida, elevaram-se para níveis acima do ponto de corte até o final do trabalho, ou seja, um ano após, indicando uma imunidade ativa adquirida. Das duas búfalas examinadas individualmente, os anticorpos colostrais foram detectados em altos níveis, mas os sorológicos em baixos níveis durante os primeiros sete dias após o parto, sugerindo uma transferência de anticorpos do soro para a glândula mamária. Da mesma forma, os dois bezerros tiveram títulos de anticorpos detectáveis já nas primeiras 24 horas após mamarem o colostro, indicando uma imunidade colostral passiva. Em conclusão, os búfalos desenvolveram uma resposta imune humoral específica contra A. marginale e foram considerados portadores deste parasita.

The aim of the present study was to analyze the humoral-immune response of water buffalo (Bubalus bubalis) naturally infected against Anaplasma marginale. For this work, colostrums/milk and blood samples were sequentially collected from buffalo cows prior and after partum for a period of 335 days and from buffalo calves from birth to 365 days after. The antibodies in the colostrums/milk and serum samples of these animals were determined using an ELISA indirect method and the data were analyzed as a mean of a group of animals with the matched ages during the period of 1999/2000 or individually during the year of 2005. The data from animals analyzed in group showed that the antibodies against A. marginale were in low concentration (below the cut off point: D.O. = 0.265 and ELISA levels, EL > 3), in the sera of buffalo, during the first 90 and 105 days, respectively for cows and calves. Then, the levels of antibodies in the serum samples of buffalo calves, slightly raised to above the cut off point and kept in higher levels up to approximately 365 days after birth, indicating active acquired immunity. Furthermore, when the animals were individually examined, the buffalo cows showed high antibody levels in the colostrums, but low levels in the blood stream during the first seven days post-partum, suggesting antibody transference from blood to mammary gland n addition to that, buffalo calves showed high antibody levels during the first 24 hours after suckling colostrum, indicating a colostral passive immunity. By conclusion, the buffalos were able to arm a humoral immune response against A. marginale and were considered reservoir of this parasite.

Detection of pathogenic leptospires in animals by PCR based on lipL21 and lipL32 genes.

Efficacy of primers capable of amplifying conserved outer membrane protein (OMP) genes i.e., lipL21 and lipL32 of Leptospira strains was tested for rapid and early diagnosis of the leptospirosis using a polymerase chain reaction (PCR). These OMP genes were found to be conserved in various leptospiral serovars viz., Canicola, Pomona, Icterohaemorrhagiae, Pyrogenes, Sejroe, Grippotyphosa, Ballum and Tarassovi as PCR products of 561 bp and 756 bp were obtained by PCR employing lipL21 and lipL32 based primers, respectively, in all these serovars. Absence of such amplicons in DNA extracted from Pasteurella, Campylobacter and Brucella confirmed the specificity of the primers. Serum and tissue samples collected from cattle, buffaloes and experimentally infected guinea pigs and calves were subjected to PCR using above primers as well as conventionally used primers G1/G2. All the sera and tissue samples, whether field samples or collected from experimentally infected animals, found positive for G1/G2 specific PCR were also positive for lipL21 and lipL32 specific PCR. The present study indicated that lipL21 and lipL32 based primers could be used for PCR based diagnosis of leptospirosis. Since G1/G2 primers are known not to amplify the DNA of Grippotyphosa, the use of primers employed in the present study could have an additional advantage in detection of cases of the disease.

Isolamento de cepas de Mycobacterium avium em búfalos abatidos para consumo / Mycobacterium avium complex in water buffaloes slaughtered for consumption

Duas cepas micobacterianas, isoladas no parênquima pulmonar e linfonodo apical de búfalos abatidos para consumo, procedentes de criatórios localizados na Ilha de Marajó (PA) e submetidas à identificação segundo ensaios recomendados para o gênero Mycobacterium, foram identificadas como pertencentes ao complexo Mycobacterium avium. Apresentaram-se considerações relativas à associação desses organismos com a Aids ó e o papel dos alimentos nessa associação , discutindo-se o impacto que a condição de germes oportunistas das espécies desse complexo têm na pandemia do HIV, assim como o risco potencial representado pelas infecções produzidas nos animais

Tuberculose em bubalinos (Bubalus bubalis var bubalis - Linneus, 1758): a doença em búfalos abatidos para consumo: aspectos anatomopatológicos, microbiológicos e consideraçöes relativas à saúde pública / Bovine tuberculosis in water buffaloes (Bubalus bubalis var bubalis - Linneus, 1758): the disease in slaughtered animals: public health concerne

Objetiva conhecer as características da tuberculose bovina em bubalinos e demonstrar a importância da doença nesses animais em termos de saúde pública; através da observaçäo macroscópica, do estudo histopatológico e do isolamento e identificaçäo de cepas micobaterianas foram amostrados carcaças e órgäos de 1735 bubalinos abatidos em Belém, Estado do Pará, determinando-se a prevalência de 7,66 por cento, observando-se 72,1 por cento de casos de alteraçöes localizadas e 27,9 por cento de casos de alteraçöes generalizadas; as alteraçöes localizadas estavam presentes em 60,25 por cento dos casos no aparelho respiratório, em 20,08 por cento dos casos no conjunto cabeça-língua, em 9,62 por cento dos casos na carcaça, em 6,28 por cento dos casos na cavidade abdominal e em 3,77 por cento dos casos na mama; 15,48 por cento das alteraçöes tuberculosas estavam presentes no parênquima pulmonar. No isolamento de 49 cepas micobacterianas tipificadas, 33 (67,3 por cento) eram de Mycobacterim bovis, 2 (4,1 por cento) de M. gordonae, 8 (16,3 por cento) de M. fortiuitum, 2 (4,1 por cento) do complexo M. avium e 4 (8,2 por cento) de micobactérias de crescimento rápido escotocromogênico; 55,1 por cento das cepas foram isoladas no aparelho respiratório, com cerca de um terço delas no parêmquima pulmonar; M. avium foi isolado como agente de alteraçäo pulmonar. Conclui que, no abate de bubalinos em Belém, as carcaças e os órgäos dos animais apresentam características anatomopatológicas indistinguíveis daquelas do processo infeccioso da tuberculose bovina. A tuberculose constitui-se em importante doença de bubalinos criados no Estado do Pará, detectada no abate dos animais e apresentando o aparelho respiratório como o mais importante sítio das alteraçöes e a via primária de infecçäo

Measurement of antibodies against foot-and-mouth disease virus in a crude antigen suspension and against the via antigen by the quantitative complement fixation test in buffaloes

Anticorpos contra o antígeno associado a infecçäo viral (VIA) e contra suspensöes antigênicas brutas das estirpes "O1" Campo, "A". Venceslau, "A24" Cruzeiro e "C3" Indaial do vírus da febre aftosa (VFA), adquiridos através da imunizaçäo natural passiva dos bufalinos, foram determinados pela reaçäo de fixaçäo de complemento. 3 animais foram testados periodicamente para a presença dos anticorpos até 6 meses de idade. Os resultados mostraram que é perfeitamente possível determinar pela técnica direta de fixaçäo de complemento, anticorpos contra o antígeno VIA e contra diferentes estirpes do VFA em búfalos, de forma satisfatória, característica esta näo observada em bovinos

Avaliaçäo dos protozoários ciliados no rúmen de búfalos (Bubalus bubalis L) e bovinos (Bos indicus L) em regime de confinamento / Rumen ciliate protozoa in buffalo (Bubalus bubalis, L) and zebu cattle (Bos indicus, L) kept in a feedlot

Num experimento de engorda em confinamento, foram utilizado nove bubalinos e nove zebuínos, todos machos castrados, de 18 a 24 meses de idade e peso médio de 340 kg, mantidos em baias individuais, consumindo dieta de 2,0 kg de soja crua moída, 2,0 kg de espigas de milho desintegradas (gräo, palha e sabugo) e silagem de sorgo à vontade (controlando-se o consumo diário). Ao final do período de confinamento, todos os animais foram abatidos e o conteúdo ruminal de cada indivíduo foi homogeneizado, sendo colhidas amostras de 30 a 40 ml de líquido ruminal e, desta, retirou-se alíquota de 10 ml em tubo de ensaio com 20 ml de formaldeído diluído em água destilada a 1:2, para fixaçäo dos protozoários ciliados. As contagens de protozoários foram feitas em 100 campos e os resultados permitiram as seguintes conclusöes: 1) a dieta favoreceu maior concentraçäo de protozoários ciliados/ml de líquido ruminal dos zebuínos que no de bubalinos, apesar destes apresentarem maior número de gêneros; 2) os protozoários ciliados digestores de fibra foram detectados em maior quantidade nos zebuínos que nos bubalinos; 3) o gênero Entodinium spp representou mais de 80 por cento do total dos protozoários ciliados identificados nos zebuínos e nos bubalinos

Aeromonas sobria in bubaline (water buffalo) abortion: growth requirement, biochemical characters, antibiotic susceptibility, experimental pathogenicity and serology.

A. sobria was isolated unexpectedly on Campylobacter selective medium from abortion specimens of 16 buffaloes. All strains (AS1-AS16) required Campylobacter growth supplement (sodium pyruvate, sodium metabisulphate and ferrous sulphate) and 10% C02 atmosphere on primary isolation. They were unusually sensitive to bile salt and failed to grow on MacConkey's agar. Biochemically, these strains were homogeneous but antibiogram profile and physiological/other characters revealed a moderate heterogeneity. In vitro antibiotic sensitivity pattern showed a number of antibiotics effective whereas only a few (penicillin and co-trimoxazole) ineffective against these strains. It took 9 days for 3 x 10(8) A. sobria organisms/ml in 5 ml quantity to terminate the pregnancy in an experimentally infected buffalo via iv route. Foetal and placental lesions were classical as that of field cases. The infection evoked serum antibody response. Apparently disease-free buffalo sera were devoid of such antibodies.

Leptospirosis in the Philippines.

Leptospirosis was first isolated in the Philippines from one of the human cases of Weil's Disease in 1932 and from then up to 1970 a total of 65 cases were studied sporadically. From 1971 up to 1973 a total of 390 cases were studied out of which 82 (21.02%) were found positive by isolation and serological examination. An outbreak of leptospirosis was followed up from 1976 to 1983 in a penal farm in Sablayan, Mindoro. At the time of the outbreak, 31% of the sera from patients and those with complaints reacted to one or more antigen pools with 40% of these reactors reacting to only one antigen pool. Only one percent of prisoners and residents without complaints reacted to one or more antigen pools, with 80% of these reactors reacting to pool 3 alone. Three and half years later, a first follow-up was done in which 9.07% reacted to one or more pools. Of these, 42% reacted to pool 2 and 82% to pool 3 alone or in combination with other pool. Ninety five percent of those reacting to Pool 2 reacted to L. pyrogenes and 88% of those that reacted to Pool 3 reacted to L. autumnalis. More than three years later after the first follow-up, a second follow up was done. This time 2.29% reacted to one or more pools. Most reacted specifically to L. autumnalis. The residents outside the penal farm were all non-reactive. Sampling from another penal colony and in four agricultural areas revealed no significant reactivity.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)